食物中添加再生物质能抵抗小白鼠S180腹水瘤的形成

摘要 目的：体内检测再生物质对肉瘤 S180的抗瘤作用。
　　 方法： 同时设对比实验和正式实验，各有昆明鼠26只，并随机分为实验组和对照组。对比实验中实验组喂饲含再生物质的饲料，对照组仅喂饲普通饲料。正式实验中，实验组和对照组每只均腹腔注射S180瘤细胞悬液，随之分为实验组13只和对照组13只，实验组喂饲含再生物质的饲料，而对照组喂饲普通全价饲料。两个实验均历时17天。实验过程中及结束时检测两组小白鼠的体重变化；观察正式实验中小白鼠腹部膨隆程度；解剖腹腔观察腹水瘤生长情况；HE染色观察瘤块细胞。
　　 结果：对比实验中两组小白鼠体重变化近乎一致；而正式实验中实验组小白鼠腹部膨隆程度比对照组膨隆程度小，实验组小鼠体重小于对照组小鼠体重，解剖结果显示，实验组腹水瘤块小于对照组，但瘤块细胞成分相同。结论：本剂量下，再生物质在体内具有抗S180腹水移植瘤形成的作用。
关键词    再生物质；S180

（一）材料与方法
1、对比实验：观察再生物质对小白鼠机体代谢的影响
　　2004年1月17日11:00PM将刚购买的昆明种雌性小白鼠（3周龄，医科院动物所，清洁级，下同）26只，随机分为实验组和对照组各13只，当日实验组改喂含再生物质为1/10的全价饲料饼干（医科院动物所），对照组继续喂饲全价饲料饼干（医科院动物所）。并同时测量体重。
　　实验前体重：
　　实验组：9.49；10.91；10.78；11.72；10.27；9.73；10.48；12.14；9.16；9.86；9.04；11.75；10.52g。=10.45±1.00     n=13

　　饲养条件为：12h/12h光照，自由饮水，温度19℃～25℃，相对湿度50%～60%。逐日观察小白鼠生理状态。并分别于2004/1/19 10:00AM、1/29  3:45PM、1/30  5:35PM、2/1  10:35AM、2/2  6:00PM进行了实验后第一次至第五次小白鼠体重测定。整个实验历时17天。
2、 正式实验：再生物质对小白鼠S180腹水瘤形成的影响
　　健康昆明种远交系小白鼠（医科院动物所，清洁级，2004/1/8 4:00PM购入）26只，雄性，6周龄，随机分为两组：实验组和对照组，并测定实验前体重。
　　实验组体重：
20.76；20.96；23.14；20.45；22.62；21.33；21.52；21.77；20.91；20.14；20.96；21.35；23.65g   为21.504±1.046g   n=13
　　对照组体重：

　　同时实验组开始换成含再生物质为1/10的全价饲料饼干（医科院动物所），对照组继续喂饲全价饲料饼干（医科院动物所）。
2004/1/9 2:00PM， 复苏S180细胞，台盼蓝活性染色法记数细胞，每只小白鼠腹腔注射S180细胞1×106个（北京大学肿瘤医院），注射时将细胞悬浮于0.2ml  10%FCS RPMI1640培养液中，饲养条件为：12h/12h光照，自由饮水，温度19℃～25℃，相对湿度50%～60%。逐日观察小白鼠生理状态。分别于2004/1/16  3:00PM、1/18  11:45AM、1/19  5:25PM、1/21  11:30AM、1/22  11:55AM、1/24  5:10PM、1/25  5:45PM、1/26  8:45PM进行了第一次至第八次小白鼠体重测定，并同时观察小白鼠腹部膨隆情况。2004/1/27  11.50AM处死两组所有小白鼠，并从两组中随机取7只小白鼠进行解剖，观察腹内容物状况，包括腹水瘤生长状况。整个实验历时17天。
3、比较对比实验和正式实验中各自实验组和对照组体重变化的趋势
　　对比实验中分两组：实验组和对照组，从开始喂饲不同的食物开始，观察小白鼠体重的变化，将实验组和对照组进行比较，那一组体重增加更为明显。由于实验组和对照组在相同的时间点测定体重，这样可以判断出那一组小白鼠与其原始体重相比，体重增加的幅度更为明显。
正式实验做法相同，在此略去。
4、测定正式实验中实验组和对照组小白鼠腹水瘤瘤块重量
　　此项只在正式实验中进行，从实验组和对照组中随机选取相同数量的小白鼠（7只），常规安乐法处死，消毒，切开腹部皮肤和腹壁肌肉。将腹水瘤（液体和块状物）流至一平皿中，将同一组的块状物合并，测重量。
5、HE染色比较正式实验中实验组和对照组腹水瘤瘤块细胞的异同
　　此项只在正式实验中进行，从“4”中得到的块状物中取少量，制成瘤细胞悬液，HE染色，观察实验组和对照组中腹水瘤块状物的细胞成分。

（二）结果
1、对比性实验和正式实验结果统计
　　经过结果分析，发现对照组比实验组多出的体重部分应该是腹水瘤部分。以下是分析。
　　表一为对比实验的结果统计。从统计结果可以看出，对比实验中，实验组和对照组小白鼠的原始平均体重很接近(分别为10.45±1.00g和10.38±1.06)，实验开始后在不同的时间点对实验组和对照组进行体重检测，发现实验组和对照组的平均体重一直很接近，实验组和对照组平均体重之差的绝对值一直很小（最大1.05g，最小0.1g），这些结果说明，尽管实验组喂饲的是含10%GIC的全价饲料，而对照组喂饲的是普通全价饲料。但实验组和对照组两组体重的变化一直同步，两组平均体重一直很接近，说明GIC并未影响小白鼠的体重，即对小白鼠总体代谢无影响。
　　表二是正式实验的结果统计。从统计结果可以看出，正式实验中，实验组和对照组小白鼠的原始平均体重很相近(分别为21.50±1.05g和21.13±0.99g)，但在实验开始后对实验组和对照组在不同时间点测定的体重结果进行比较发现，实验组和对照组的平均体重在实验开始后第7天就已经相差2.59g，对照组体重大于实验组，随时间延长，实验组和对照组平均体重之差越来越大（最大7.86g，最小1.53g）。
　　正式实验中，实验组和对照组小白鼠均接种了相同数量的S180细胞，再考虑到对比性实验的结果，说明实验组喂饲的10%再生物质的全价饲料能够抑制S180腹水瘤的形成，而普通全价饲料的抑制作用小于10%再生物质的全价饲料，因此对照组增加的体重应该是腹水瘤部分。

表一   对比性实验结果统计

表二 正式实验结果统计

2、用图形表示对比性研究的统计结果
　　用统计图的方法可以更清楚地说明上述结论，图1和图2是对比性实验统计结果的折线图，说明见图下。图3和图4是正式实验统计结果的折线图，说明见图下。

图1   对比实验中实验组小白鼠和对照组小白鼠体重均数的变化趋势图。趋势图显示从实验开始的第0天开始，实验组和对照组平均体重几乎同步增加，二者近于重合，说明实验组和对照组虽然所喂饲食物成分不同，但在17天的实验过程中对体重无影响。

图2  对比实验中实验组和对照组各自平均体重与原平均体重之差的变化变化趋势图。此图显示从实验开始后的第3天，实验组和对照组平均体重的增加几乎是相同幅度的，二者近于重合，同样说明了图1中的结论。

图3  正式实验中实验组小白鼠和对照组小白鼠体重均数的变化趋势图。趋势图显示从实验开始的第0天开始，实验组和对照组平均体重增加不同步，对照组大于实验组，综合考虑对比实验的结论，对照组多出的体重部分应该是腹水瘤部分。

图4  正式实验中实验组和对照组各自平均体重与原平均体重之差的变化变化趋势图。此图显示从实验开始后的第7天，实验组和对照组平均体重的增加完全不同步，对照组明显大于实验组，再次说明了图3中的结论。

3、测定正式实验中实验组和对照组小白鼠腹水瘤瘤块重量
　　此项只在正式实验中进行，从实验组和对照组中随机选取的7只小白鼠，常规安乐法处死，消毒，切开腹部皮肤和腹壁。将腹水瘤（液体和块状物）流至一平皿中，观察二者区别，发现实验组腹水中出血较多，而对照组出血少，原因待查；腹腔内脏器变化相似，如肝脏、脾脏和肾脏均有一定程度的萎缩，但幅度相同。最后将各自的瘤块合并至不同的平皿中（图5），测定重量，结果如下：
　　实验组：6.874g/7只=0.982g/只；
　　对照组：21.90g/7只=3.129g/只；二者差异显著。

5A	5B
图5   正式实验中7只实验组小白鼠（5A）和7只对照组小白鼠（5B）的腹水瘤块图。实验组瘤块小，表面有血，对照组瘤块明显大，表面血少。

4、HE染色观察正式实验中实验组瘤块和对照组瘤块中细胞成分
　　结果见下列各图，结果显示，实验组和对照组瘤块的细胞成分是一样的。瘤细胞的重要特征是细胞核大，核浆比例大。在均为瘤块的情况下，进行上述第“3”项结果的说明就更有意义。

图6     正式实验中实验组小白鼠腹水瘤块细涂片HE染色结果，图中显示较多的S180瘤细胞(红箭头)，也显示较多的已经死亡的S180细胞(蓝箭头)。

图7   正式实验中对照组小白鼠腹水瘤块细胞涂片HE染色结果，图中显示较多的S180瘤细胞(红箭头)，也显示较多的已经死亡的S180细胞(蓝箭头)，视野中可见到尚处于分裂状态的细胞（黑箭头）。

（三）  简要讨论
　　动物移植性肿瘤体内实验法，是检测和筛选抗肿瘤药的通用方法，本实验用小白鼠进行实验，用肉瘤S180检测药物的抗瘤活性，属常用方法之一。S180是一种肉瘤细胞株，腹腔接种以腹水型生长，接种在实体组织则以瘤块型生长，可在昆明鼠和其它品系的小白鼠体内生长，特别适合于做体内抗瘤实验。本实验参考标准要求操作，结果可以用来判断药物的抗肿瘤活性。综合本实验各项指标，显示再生物质对动物源性肉瘤细胞S180具有抗瘤活性，作用明显。
主要参考文献
　　严惠芳，陈瑞婷，周金煦，等。动物肿瘤体内筛选法。在“药理实验方法学”。徐叔云，卞如濂，陈修 主编。北京：人民卫生出版社，2002，第三版，1757～1779
　　[据2004年1月8日-2月2日进行的上述实验的实验结果整理而成]