| MEBT／MEBO促进深度烧伤创面再生修复的组织学观察 |
期刊号：1999年第三期
中国烧伤创疡科技中心临床部（100053）萧摩 |
〖摘要〗目的：从组织学角度验证MEBT／MEBO治疗深度烧伤创面能够达到上皮组织生理性完全性再生修复。方法：采用电子显微镜和免疫组化技术对MEBO治疗的创面上皮组织各期的组织学形态进行观察。结果：深II浅III的烧伤创面经MEBT／MEBO治疗后，上皮组织的组织形态可以恢复正常。结论：MEBT／MEBO有促进深度烧伤创面再生修复并达到正常组织形态的作用。
〖关键词〗MEBT／MEBO 深度烧伤 电子显微镜 免疫组化
Histological Observation On The Effect Of MEBT／MEBO On promoting The Prgeneration And Repair Of Deep Burn Wounds Xiao Mo China Science And Technology Center For Burns， Wounds And Ulcers 100053
〖Abstract〗objective： Using MEBT／MEBO For Treating Deep Burn Wounds To Achieve Epithethial Tissue Complete physiological Regeneration And Repair。 Method：Histological Observation On Wound Epithethial Tissue At Different Stages Were Made By Using Electron Microscope And Immuno－His Tochemical Techniques。 Result：Deep 2nd And Superficial 3rd Degree Burn Wounds After Treated With MEBT／MEBO ， The Morphology Of The Epithethial Tissue Recovered To Normal。 Conclusion：MEBT／MEBO Has The Effect Of Promoting The Regeneration And Repair Of Deep Burn Wounds To Regain Normal Morphology
〖Key Words〗MEBT／MEBO Deep Burn Wound Electron Microscope Immuno－Histochemical Method
目前，大量临床病历观察结果证实MEBT／MEBO对于大面积深度烧伤创面有促进上皮组织再生修复的作用。通过光学显微镜对烧伤创面组织学观察，已经明确烧伤皮肤组织须MEBO的作用下，再生修复的病理组织学过程。
在此基础上，本组资料重点对深度烧伤创面上皮组织在MEBT／MEBO作用下再生修复过程进行了电子显微镜观察并应用免疫组化技术，进一步证实MEBO促进深度烧伤创面愈合并达到生理的完全性再生修复。
临床资料
烧伤患者8例见表1），均全国应用MEBT／MEBO治疗，除1例死于多脏器功能衰竭外，余7例创面达到生理再生修复愈合（见图1－3），其中5例行创面组织电镜观察（ABCED）6例行免疫组化光镜（ABCFGH）
电子显微镜观察
由于光镜的分辨率有限，不能从细胞水平观察皮肤组织的病理改变和再生修复过程，本组采用电镜观察对经MEBT／MEBO治疗愈合的烧伤皮肤组织进行细胞水平的研究。
一、 标本处理：
在病人烧伤部位分别于伤后24小时、5天、10天、20天、30天（顺延）采取新鲜组织标本并立即用10％戊二醛溶液浸没固定，使组织结构得到完整保存。
采取标本时间至光镜和电镜观察时间不超过30天。
二、 检查方法：
组织标本固定后经包埋、切片、定位、染色等操作程序，电镜（日本松下）作透射观察，并作激光电脑摄片。
三、 观察内容：
1.烧伤病人上皮组织细胞应用MEBT/MEBO治疗各阶段再生修复情况。
2.疏松结缔组织（纤维和细胞）的再生修复过程。
四、观察结果
1、上皮组织细胞：
深度烧伤创面在经过MEBT／MEBO治疗10天后，上皮组织再生修复的趋势即良好出现，棘层的棘细胞（SPINOUS CELL）能达到较完全的再生，而且细胞间的相邻细胞胞质突起，以桥粒（DESMOSOME）相连接（见图4）。在电镜3000－20000倍观察下，桥粒处的相邻细胞膜之间的间隙为20－30NM，其中充满丝状物，并在中轴处交织成一条致密线，相邻两细胞膜的胞质面上均有致密物质构成附着板（见图5），有若干张力细丝 （tonofilament）附着于板上，并呈襻状折回胞质。
在电镜观察中还可以见到表皮的基底细胞层，此层细胞是表皮中分裂增殖最强的一层细胞，基底细胞的侧面和浅面是桥粒连接其底面则以半桥粒与基膜连接（见图6）。
2、结缔组织细胞：
（1） 纤维细胞
皮肤组织的再生修复与纤维细胞关系非常密切，再生的皮肤组织中纤维细胞，约上皮细胞的4倍。MEBO有促进纤维母细胞成熟生成胶原纤维、弹性纤维、网状纤维以及基质成分。该促使纤维细胞成熟的过程即MEBO治疗烧伤减轻或防止瘢痕生成的过程。
生理、生化过程
细胞内：在细胞内的粗面内质网合成前胶原蛋白（分子），在高尔基复合体＋糖基，分泌到细胞外。
细胞外：前胶原蛋白在肽内切酶作用下，生成原胶原蛋白，经过聚合、重排、生成胶原纤维，经过互相粘连则生成胶原纤维。
以上的生理生化过程是胶原合成的过程。MEBO在其中哪一个环节起作用，达到“催化酶”的效果，尚待进一步研究探讨。但是，从电镜观察中，在深度烧伤创面应用了MEBT／MEBO后，10－20天纤维母细胞内粗面内质网结构明显增殖活跃（见图7电镜3000－17000倍观察）。在用药30天从20000倍电镜观察中，可见整齐排列的胶原纤维，已经成熟恢复正常结构。镜下组织结构均匀一致，直径0．1μm－0．5μm 并有明暗相间，周期为64nm 的横纹，未见到胶原束漩涡样或结节样排列（见图8）。
这种组织结构说明MEBT／MEBO治疗后，创面再生修复而且地瘢痕愈合的组织学基础。
（2） 非恒定的游走细胞的观察
包括：巨噬细胞、浆细胞、白细胞和肥大细胞等。分述如下：
①巨噬细胞：是血液中单核细胞穿出血管分化而成，当其进入结缔组织后，体积增大，溶酶体增多，吞噬功能增强，有防御作用，还参与调节免疫应答，并分泌多种生物活性物质（白介素I、淋巴细胞活化因子）通过调节免疫应答，共同杀伤和吞噬靶细胞（细菌、坏死组织细胞等）。
电镜观察：经过MEBO治疗（15天）创面组织中单核细胞、吞噬细胞比较活跃（见图9）。这与MEBO提高机体免疫力、抵抗力有关。
②浆细胞：是B淋巴细胞在抗原（炎性介质等）的反复刺激下，发生母化转变为浆细胞。可以分泌免疫球蛋白或抗体（antibody）。
电镜观察可以见到应用MEBO治疗4中，创面中B淋巴细胞向浆细胞的化生过程（见图10）。
③肥大细胞：
本组病人中很少见到肥大细胞，只在一位因拖延治疗（经费欠缺）全身情况较差的患者创面标本中发现肥大细胞（见图11）。
肥大细胞的细胞颗粒内含有肝素组胺、白三烯（慢反应物质）、嗜酸性细胞、趋化因子等。这些活性物质有抗凝血、毛细血管并使毛细血管通透性增加等作用，还可以使细支气管痉挛、使嗜酸性粒细胞聚积到过敏反应部位。
3、神经纤维：
在伤后15天应用MEBT／MEBO治疗的创面中，发现典型的神经纤维（见图12）
这与临床上常见于应用 MEBO治疗的创面中，发现典型的神经纤维（见图12）。 这与临床上常见于应用MEBO治疗的烧伤患者，在伤后半个月左右创面感觉恢复，在换药治疗中有疼痛感，与神经组织再生的修复有关。
免疫组化技术的应用
免疫组织化学（Immunohistochemistry ）是应用免疫学基本原理－抗原抗体反应，对组织或细胞内抗原或抗体物质定位性定位的新型组织学技术。 对免疫组化染色结果判断，一般阳性结果是抗原存在。
本组试验应用该项技术主要对烧伤创面经过MEBT／MEBO治疗的各阶段组织标本以及经治疗后上皮组织再生修复的皮肤组织进行检查，以验证新生的皮肤组织具备正常（或接近正常）皮肤机构与功能，而非瘢痕愈合（见图13为HE染色）。
操作方法：
利用健康人上皮组织（复层鳞状上皮）采用克隆技术使上皮组织在试验动物鼠体内复制形成抗体（试剂），并用此试剂与被烧伤经过MEBO治疗的皮肤组织切片进行生物化学反应，以出现颜色的特异性变化，观察再生修复的上皮组织在MEBO治疗中各阶段的情况变化。
本组病例采用细胞角质素（Cytokeratin）AE3进行检查，以此为抗体所得结果可以鉴别标本组织是上皮性细胞和非上皮性细胞，从而证实创面是在MEBO作用下自身再生修复（见图14、15）。
参考文献
〖1〗 徐荣祥 ， 中国烧伤创疡学（烧伤湿性医疗技术）局部治疗部分 1997
〖2〗 陈意生， 烧伤病理学， 1993
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