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基金项目：2008年国家自然科学基金项目(No.：30860356)，2009年广西中医学院科研课题 (No.：P2009132)

作者单位：530001　广西　南宁，广西中医学院（唐乾利，付军，狄钾骐，韩珊珊，代波，冯靖）；530023　广西　南宁，广西中医学院第一附属医院（赵书晓） 

【摘要】目的  探讨烧伤湿性医疗技术（MEBT/MEBO）对大鼠慢性难愈合创面肉芽组织的影响及其可能的作用机制。方法　SPF级SD雄性大鼠45只，简单随机抽样方法分为MEBO组、贝复济组、模型组，每组15只。用药后第8 d观察创面愈合情况：①肉芽组织生长情况；②光镜下创面组织变化情况；③电镜下观察创面组织变化情况。结果　MEBO组创面愈合时间为20.13 d±1.41 d，短于贝复济组的22.07 d±1.62 d，明显短于模型组的30.40 d±1.18 d，均有统计学意义（P<0.01）；光学显微镜下观察：与贝复济组及模型组比较，MEBO组创面毛细血管计数较多，MEBO组、贝复济组、模型组毛细血管分别为（12.13±2.26）条、（9.87±1.99）条、（7.60±1.50）条， MEBO组与贝复济组及模型组比较有统计学意义（P<0.01）；透射电镜结果示：MEBO组治疗的创面成纤维细胞、成纤维细胞线粒体结构情况明显好于贝复济组及模型组。结论　MEBT/MEBO能明显促进大鼠慢性难愈合创面成纤维细胞的增殖，促进新生毛细血管的增殖，调节创面修复基质的形成等作用而发挥MEBO的综合调控机制，最终促进肉芽组织形成，加速创面愈合。

【关键词】　MEBT/MEBO；慢性难愈合创面；病理学；实验研究

【标识符】  doi：10.3969/j.issn.1001-0726.2011.04.002

【文章类型】   实验研究

体表慢性难愈合创面(俗称溃疡)是由一系列创伤和疾病所致，这类创面具有病程长、对外观影响大以及并发症多等特点。中医外治溃疡历史悠久，近年来，我们对如何治疗慢性难愈性皮肤溃疡，进行了大量的实验和临床研究^[1~2]，期待通过不断的努力寻找到一种既能促进创面愈合，降低感染，减少瘢痕形成，又能广泛推广的适用技术，以提高创面修复质量，降低溃疡治疗成本，提高我国慢性难愈创面的治疗水平^[3]。本实验进一步探讨MEBT/MEBO对大鼠慢性难愈合创面肉芽组织病理学结构的影响，以期从不同侧面揭示MEBT/ MEBO的改善微循环、祛腐生肌、促进创面再生与修复作用的机制。

1. 实验材料及步骤

1.1. 实验动物和药品

45只SPF级SD健康雄性大鼠，2月龄，体质量200 g~250 g（广西医科大学动物实验中心提供）。美宝湿润烧伤膏（MEBO），北京光明中医烧伤创疡研究所监制，汕头市美宝制药有限公司生产，国药准字Z20000004；贝复济(贝复济即外用重组牛碱性成纤维细胞生长因子-bFGF)，珠海亿胜生物制药有限公司生产，国药准字S19991021；注射用青霉素（Benzylpenicilin Sodium for Injection），石药集团中诺药业有限公司生产，国药准字H19993622；盐酸氯胺酮注射液（Ketamine Hydrochloride Injection），江苏恒瑞医药股份有限公司生产，国药准字H32022820。实验过程中所有药物均使用同一批次。

1.2.实验造模及分组

将45只SPF级SD健康雄性大鼠购买回来后，饲养1 w。实验当天将其简单随机抽样方法分为MEBO组、贝复济组和模型组，每组15只。参照全层皮肤缺损制做法经改进制成大鼠慢性难愈合创面模型^[4]。将大鼠用盐酸氯胺酮(100 mg／kg)腹腔注射麻醉，造模区选择肌肉组织较丰富的两侧大腿靠近臀部处剪毛，用直径 15 mm的图章标记造模面积，在无菌条件下，用外科方法作两条深达筋膜、直径为15 mm 的全层皮肤缺损开放性创面，加盖两层消毒干纱布，用胶布“丰”形固定。造模后即刻注射醋酸氢化可的松(8 mg／100 g体重)，建成慢性难愈合创面模型。

1.3. 换药方式

各组于造模当天即开始换药，2次/d。每只动物在换药前先将创面原来的残留药物及渗出物蘸净，然后以生理盐水清洁创面。MEBO组创面换药方法按照《烧伤再生医学与疗法临床手册》^[5]以药膏直接涂布于创面上，厚度约1 mm，然后再用湿润烧伤膏浸透的纱布按创面大小剪成小块外敷于创面，最后在创面上加盖两层消毒干纱布，用胶布固定，2次/d。贝复济组创面外喷贝复济药液，而后以贝复济药液浸透的纱布，按创面大小剪成小块敷于创面上，然后在创面上加盖两层消毒干纱布，用胶布固定，2次/d。模型组创面外敷单层生理盐水纱布，然后在创面上加盖两层消毒干纱布，用胶布固定，2次/d。

1.4.实验标本采集

各组均于用药后第8 d，将大鼠用氯胺酮麻醉，取相同部位创面的新生肉芽组织为所需实验标本。作常规病理检查的标本用10%福尔马林固定。电镜观察的创面新生肉芽组织，加2.5%戊二醛（温度保持在0℃～4℃）固定后送电镜室。

1.5.检测指标及方法

在每天换药过程中，观察大鼠创面愈合的大体情况。主要观察创周有无红肿变化、创面有无水肿渗出、创面肉芽组织生长情况及创面愈合时间等。用药后第8 d取创面肉芽组织，妥善固定后作常规病理检查，主要观察标本的毛细血管生长等情况。用于电镜观察的创面肉芽组织，妥善固定后送电镜室脱水、包埋、切片后观察成纤维细胞及成纤维细胞中线粒体形态结构的情况。

1.6. 统计学处理

数据以均数±标准差（x(_)±s）表示，用 SPSS 13.0软件进行方差分析，P<0.05为有显著性差异，具有统计学意义。

2.结果

2.1.创面大体生长情况

用药后第8 d，MEBO组创面洁净润泽，创缘组织向创面向心性爬行，肉芽组织生长迅速，呈颗粒状，高出原有创面，触之易出血，创周可见稀薄淡黄色渗出液。贝复济组愈合情况较MEBO组稍差，可见少许暗红色肉芽组织，创面边缘有少许分泌物，生长稍慢。模型组有明显感染征象，创面水肿且有黄色脓液分泌物析出，创面肉芽组织颗粒细小，色质较白，创面较前有所扩大，可见明显的皮下筋膜和肌肉组织。

2.2.创面愈合时间

MEBO组创面愈合时间与贝复济组及模型组创面愈合时间相比均较短。MEBO组创面完全愈合时间为20.13 d±1.41 d，优于贝复济组的22.07 d±1.62 d及模型组的30.40 d±1.18 d。MEBO组与贝复济组相比P＝0.002，P<0.01，有明显差异；MEBO组与模型组相比P＝0.0000，P<0.01，有显著差异，均具有统计学意义（见表1）。表明MEBO具有促进大鼠慢性难愈合创面愈合的作用。

表1   大鼠慢性难愈合创面愈合时间比较（x(_)±s）

注:MEBO组与贝复济组比较^■■P<0.01； MEBO组与模型组比较^**P<0.01。

2.3.光镜观察结果

MEBO组用药后第8 d，创面肉芽组织均生长旺盛，有丰富的毛细血管存在，周围可见成纤维细胞和胶原纤维，创面周围表皮细胞开始向伤口方向延伸蔓延；贝复济组用药第8 d，创面肉芽组织均生长尚可，毛细血管生长数量与MEBO组相比较稍有减少，差异明显；模型组用药第8 d，可见少量的毛细血管且局部渗出较多，有大量的炎性细胞（见图1～图3）。毛细血管数量：MEBO组、贝复济组、模型组分别为（12.13±2.26）条、（9.87±1.99）条、（7.60±1.50）条。毛细血管数量MEBO组与贝复济组相比较P＝0.007，P<0.01，有明显差异，具有统计学意义； MEBO组与模型组相比P＝0.0000，P<0.01，有显著差异，具有统计学意义（见表2）。

表2   用药后第8 d新生毛细血管计数比较（x(_)±s）

注:MEBO组与贝复济组比较^▲▲P<0.01； MEBO组与模型组比较^★★P<0.01。。

2.4.透射电镜观察结果

电镜结果显示，在用药8 d后，相同部位的肉芽组织观察结果为：MEBO组治疗的创面标本肉芽组织中可见到大量成纤维细胞，成纤维细胞的胞体大，胞核规则明显, 胞质内线粒体、内质网、核糖体等没有明显的扩张, 胶原纤维呈有序排列, 粗细适中，较贝复济组情况稍好，明显好于模型组（见图4 ~图6）。MEBO组治疗的创面血管内皮细胞中线粒体数量较多，且结构较完整，呈圆形或椭圆形,嵴结构完整且清晰；贝复济组血管内皮细胞线粒体数量较MEBO组少，且结构稍差；模型组中血管内皮细胞线粒体数量最少，结构最差，线粒体嵴疏松扩张，有的断裂、缺失，线粒体肿胀（见图7~图9）。

3. 讨论

创面修复是一个复杂而有序的过程，其基本过程是肉芽组织增生。肉芽组织是由大量的毛细血管和微小血管及丰富的成纤维细胞构成，并伴炎性细胞浸润。创面的肉芽组织形成，填充组织缺损，有利于增强创面的抗感染能力，有利于肉芽组织创面发生收缩和愈合，并为上皮爬生创造必要条件。肉芽组织主要由成纤维细胞和新生毛细血管构成。毛细血管内皮细胞和成纤维细胞增殖能力的增强，可明显促进肉芽组织增生，同时细胞能分泌许多功能蛋白质，可促进创口收缩和创口扩张能力^[6]。成纤维细胞是皮肤创伤修复的关键性细胞，是主要的修复细胞，有人把它比作是创伤修复的“工程师、建筑者和管理员”。它能够分泌多种细胞外基质和细胞因子，具有促进胶原合成，分泌细胞外基质和多种细胞因子等功能，调控创伤修复的全过程。创伤形成后，成纤维细胞被激活，由静息状态转变为活化状态，在细胞因子等因素的调控下，成纤维细胞发生增殖、迁移并合成、分泌胶原和细胞外基质成分以及胶原酶等，参与肉芽组织形成、创口收缩及组织重建的过程，并且起重要作用，其数量变化会对创伤愈合产生巨大影响^[7]。

美宝湿润烧伤膏（MEBO）以麻油和蜂蜡作为药物基质, 配以黄芩、黄柏、黄连等以清热解毒、燥湿。当归、地龙等药物可活血化瘀，再以黄芪与当归配伍，即为当归补血汤之方义，功能为补气血，生新肉。在制备方法上运用高科技方法和设备，使之成为独特的蜡包油型框架结构剂。MEBO框架结构剂型是随着温度变化而变化的可变剂型，在常温下呈固态软膏形态，外涂于创面后，由于皮肤温度的变化而成为液态。MEBO中含有亲脂性很强的芝麻油，使得液态药物与坏死组织发生反应，反应后的药物失去亲脂性，并与创面的渗出物、液化物混合后，向外移动以至排出。上层的药物不断液化，底面的坏死物和失效药物不断的向外排出，新鲜的MEBO继续渗入组织，这样循环往复，从而达到坏死组织层由表入里液化并无损伤性地排出。

本实验表明，MEBT/MEBO能明显缩短实验性SD雄性大鼠体表慢性难愈合创面的修复愈合时间，具有促进大鼠体表慢性难愈合创面愈合的作用。通过本实验研究表明，MEBT/MEBO可通过对大鼠体表创面中成纤维细胞的调控，促进成纤维细胞的分裂增殖，促进新生毛细血管的生长，加快创面肉芽组织的形成，改善创面微循环，调节创面修复基质的形成，从而提高创面的修复能力，进而促进创面愈合。本实验进一步丰富和发展了烧伤湿性医疗技术，为开发美宝湿润烧伤膏新的临床适应症进一步提供了实验依据和理论依据。

参考文献

[1]唐乾利,郭璐,王权胜,等.MEBT/MEBO对血管内皮细胞粗面内质网影响的实验研究[J].中国烧伤创疡杂志,2010,22(4):252~257.

[2]卢栋,郭璐,唐乾利,等.MEBT/MEBO治疗慢性难愈合创面60例临床疗效观察[J].中国烧伤创疡杂志,2010,22(5):346~350.

[3]唐乾利,张力,伍松合,等.努力开展科研工作,规范化推广烧伤湿性医疗技术—“烧伤湿性医疗技术的规范推广应用研究”工作总结[J].中国烧伤创疡杂志，2008,20(1):1~5.

[4]付小兵,孙同柱,盛志勇.几种用于创伤修复研究的动物模型[J].中华实验外科杂志,1999,16(5):479~480.

[5]徐荣祥.烧伤再生医学与疗法临床手册[M].北京:台海出版社,2006:79~80.

[6]付小兵,田惠民.国外创伤研究的新进展[J].国外医学·骨科学手册,1994, 15(3):147~152.

[7]秦全江.成纤维细胞在皮肤创伤愈合中的作用及其调控[J].国外医学创伤与外科基本问题分册,2000,12(1):33.

（收稿日期：2011-05-18）