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A QUANTITATIVE STUDY ON THE DISTRIBUTION OF HUMAN CUTANEOUS NERVE 1．NORMAL BABIES

〖内容摘要〗用S－100蛋白免疫过氧化物酶染色方法研究了正常婴儿皮肤神经的数量、分布与形态学特点。证明婴儿手掌的皮神经分布数量最多（109个／0．5㎝2）；而颈部、肩部、背部、面颊部及膝部皮神经数量差异不明显（70－78个／㎝2）。大多数皮神经终末在真皮乳头层小血管球附近和真皮乳头下及汗腺周围。本研究为探讨各种皮肤疾病及损伤提供新的形态学资料。

关键词：皮神经 S－100蛋白酶 计量研究

关于婴儿皮神经的数量与分布情况，国内外未见详细报道。利用职S－100蛋白酶能较好地显示神经纤维雪旺氏细胞的特性，我们采用该染色方法，观察了婴儿几个区域皮肤内神经的分支数量、分布及走行特点，为皮肤烧伤、创伤及各种皮肤病所致皮肤的皮神经损害的深入研究提供新的资料。

材料和方法

一、 标本及来源：

取生后6个月意外死亡并在死亡后10小时以内的婴儿尸体3例，分别切取面颊部、颈部、肩部、背部，膝关节前方及手掌鱼际处皮肤，面积为1．0㎝×0．5㎝，带少许皮下组织，放入10％的福尔马林固定液中固定48小时，之后用常规石蜡包埋法包埋这些皮肤组织块，做水平及垂直两种切片，切片厚度为5，进行染色观察。

二、 染色试剂：

用美国SINGMA化学公司生产的试剂盒，内含第一抗体（兔抗S－100蛋白抗体）、第二抗体（生物素标记的羊抗兔IGG抗体），抗生物素的过氧化酶结合物以及AEC显色剂。

三、 检测方法：

将厚5的皮肤组织石蜡切片经二甲苯脱蜡，依次经100％、95％、90％等次递酒精脱水和蒸馏水水化。加入3％过氧化氢液灭活15分钟，去除多余的封闭剂，再加入第一抗体。在室温下孵化1小时，用PBS液冲洗，再加入第二抗体。过20分钟后，再用PBS液冲洗后加入AEC显色剂。孵化10分钟，用蒸馏水冲去浮液，再用MAYER'S苏木素对比染色2分钟，最后流动自来水下兰化后用甘油明胶封固并镜检。

人皮神经分支的特点是：常见3个以上的着色呈红棕色的雪旺多细胞密集聚合在一起，呈圆形、椭圆形或呈波纹状弯曲的形态。依据神经小分支与表皮突或其它皮肤的附属结构之间的距离，可推断其供应、支配与所属关系。

观察结果

我们观察到，在S－100蛋白免疫过氧化物酶染色切片中，雪旺氏细胞呈棕色红色，由于切面不同可呈现圆形，椭圆形或波纹状等各式各样的形态。在真皮乳头层、网状层中各种皮肤的附属结构例如毛囊、汗腺、皮脂腺、环层小体等都清晰可见、层次分明。着色并靠近这些皮肤附属结构附近的呈棕红色的神经细小分支清晰可见。计量学的观察证明：这几个部位的切片中，以手掌鱼际部的神经小分支数目最多，平均为109个／0．5㎝2，而其它几个部位如面颊部、颈部、肩背部、膝部皮肤的皮神经数量差异不大（见表1）。

我们观察到：在真皮乳头层，皮神经小分支多分布表皮突下方和乳头内小血管丛附近（见图1）。数量较多而直径较细，通常由3－4个着色的雪旺氏细胞聚集到一起，有时还可见到波纹状弯曲的细小皮神经分支。而在真皮网状层，这些皮神经分支通常分布在皮脂腺、汗腺毛囊的根部周围和真皮网状层血管丛附近。其数量虽然相对少，但纤维直径确较大，也呈现圆形、椭圆形或波浪形弯曲（图2－4）。在直径较大的皮神经周围尚可见到明显的被结缔组织膜所包绕。在这几处皮肤区中，一个共现的特点是在真皮网状层中皮神经的分支多位于血管球附近。

讨论

一、 S－100蛋白酶组化法染色的优点：

迄今为止，一些传统的染色方法只能显示直径较粗的皮神经，而对于那些直径细小的皮神经则难以显示。皮肤是人体的屏障，具有多种复杂的生理功能，其中以感受刺激引起应答性反应最为重要。这些功能的实现在意义上讲依赖于皮神经的数量、配布与功能。因此显示皮神经的构筑和定位对于研究皮肤的功能是至关重要的。自从HARRIETTE等〖1－2〗报道用S－100蛋白酶组化染色显示周围神经中雪旺氏细胞、黑色素细胞、表皮中的郎格罕氏细胞、汗腺细胞和肌上皮细胞均可呈S－100蛋白是细胞浆内存在的一种酸性钙结合蛋白。因其可溶于100％的硫酸铵溶液而得名。该蛋白在福尔马林液固定，石蜡包埋的切片中保存良好。虽然，正常皮肤中的雪旺氏细胞、黑色素细胞、表皮中的郎格罕氏细胞、汗腺细胞和肌上皮细胞均可呈S－100蛋白阳性反应，但着色程度可因染色方法与细胞种类的不同而不同。用本方法能够很清晰地显示出具有鉴别性特征的着色部位神经组织的形态结构。尤其是用了敏感的ABC显色法以后，由于该方法较PAP（酶抗酶）法更敏感，显色更好，可使背景染色淡化，从而使神经组织的辨认更清楚。

二、 婴儿一些皮肤区皮神经的数量与分布的特点：

应用ABC法对正常婴儿的面颊部、颈部、肩部、背部、膝前部、鱼际部皮肤S－100蛋白免疫过氧化物酶染色结果表明：在皮肤的真皮层内皮神经分布的数量多，而在上述这几个皮肤区中以鱼际部皮神经数量最多。表明在这几个区域中鱼际部皮肤的敏感性最强，这一结果为手的皮肤感觉敏锐提供了实验依据。

真皮乳头内的许多细小神经分支的存在为临床浅II与深II烧伤时皮肤的剧烈疼痛的原因提供了依据。另外，真皮网状层皮神经多于位于血管球附近，形成易于分辨的圆形、椭圆形或波浪形弯曲的小分支，表明它们与血管球内包裹的皮肤附属结构关系密切。

婴儿皮肤皮脂腺尚未发育完善，大部分毛囊处于相对休止期，但基本的神经纤维结构和配布的大体方式与成人近似。本研究对理解麻风杆菌侵犯破坏皮神经末稍引起皮肤麻木提供了佐证。皮神经的计量学研究和分布规律的探讨对于深入研究皮肤损伤、病变产生的感觉障碍及研究治疗改进措施提供了新的形态学资料。

参考文献

〖1〗 Harriette J． Kahn． M．D；F．R．C．P（C）；Alexander marks， M．D．Et Al： Role Of Antibody To S100protein In diagnostic pathology．Am．J．Clinic Pathology 1983，79：341－47

〖2〗 Marie－Jose Vanstapel M．D；Kevin C． Gatter Ph．D et al： New sites of human s－100 immunoreactivity detected with monoclonal antibodies。 Am．J．Clinic Pathology 1986，85（2）：160－68

〖3〗 曹呜综述：免疫组织化学技术的一些进展。国外医学生理病例科学分册1985，5（3）：156－59