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A COMPARATIVE STUDY OF THE EFFECT OF MEBO AND OTHER DRUGS ON THE崐HEALING RATE OF RABBIT CORNEAL EPOITHELIAL DEFECT

山东莱芜市第二人民医院 黄庆山 尚宪荣

[内容提要] 用等大圆形人工上皮剥落的兔角膜为模型,分MEBO及多组对照用药,观察各组对角膜上皮愈合速度的影响,结果,MEBO组、同种血清及0.5%地塞米松组均有明显促进上皮愈合的功效.2.5万u/ml维生素A效果不明显,戴角膜接触镜有延缓上皮愈合的作用.同时,观察了伤口周围上皮细胞向中心移行,6小时前为潜伏期,受损而尚存活的细胞向功能细胞转化,其后为愈合期,以恒定的速度向中心移行.本研究所证实,MEBO对促进角膜上皮缺损愈合作用明显高于其他药物。

关键词:MEBO 角膜上皮 愈合速率

角膜上皮层由深层的基底细胞、中层的翼状细胞和表层的鳞状细胞构成.表层表面的微绒毛吸附泪液,形成泪膜.深层的后面为基底膜,位于角膜的前弹力膜上.角膜上皮层是微生物侵犯的天然屏障,一旦破坏,易于感染及脱落.某些角膜病,如树枝状角膜炎、神经麻痹性角膜炎、复发性角膜上皮脱落、碱性烧伤、水泡性角膜炎等;某些手术,如玻璃体切割和视网膜脱离时,刮去角膜上皮进行眼内检查玫手术,都要损伤上皮或与上皮有关.不论何种原因所致的角膜上皮缺损,能否迅速完整地修复,是恢复角膜生理功能,保持良好视力的关键.角膜上皮功能对促进角膜深部伤口愈合和胶原纤维的形成起到重要作用[1].本文用同等大小人工上皮剥脱的兔角膜为模型,分别用MEBO、0.5%地塞米松,2.5万U/ml维生素A、同种血清和生理盐水对照治疗,并以戴含水率40%的软性角膜接触镜,用以了解角膜上皮再生的速度并对其疗效进行证人。

实 验 方 法

一、动物:体重2~3kg健康家兔82只.

二、麻醉:35%乌拉坦耳静脉缓注5~8ml,不充分时加乙醚入。

三、手术:开睑器开大睑裂,滴2次1%的卡因两滴,作表面麻醉,用直径8mm的环钻于角膜中部作表层压痕,1%荧光素染色后用生理盐水冲洗,显露环痕后用柳叶刀刮支环内全部上皮,再荧光素染色呈8mm均匀着色圆状上皮缺区.

四、分组观察：实验分为６组，每组１２只兔，涂ＭＥＢＯ者每6小时1次,滴药及生理盐水者,每2小时1次.角膜接触镜组不滴用任何药物,其中6只眼每6小时取下角膜接触镜,荧光素染色测量1次.另6只眼24小时后用同法观察.此外,10只兔只用生理盐水棉棒清拭分泌物,不滴用药物,分别于０、２、４、６、１２、１８、２４、３０、３６、４８小时,将角膜取下，显微镜观察上皮愈合情况[2]。

结 果

根据观察记录[2],平均愈合时间分别为:生理盐水组为48.6小时,维生素A组47.36小时,血清组45.18小时,MEBO组42.78小时,地塞米松组46.5小时,角膜接触镜组65.3小时.各组愈合度,经统计学处理见表1、2。

以上经方差齐性检验,资料方差不齐,故行秩和检验.结果如下:H=37.01,p<0.005,认为六组损伤角膜上皮愈合速度有差别.所处理组间秩和检验结果见表2。

除生理盐水与维生素A,维生素 A与地塞米松,血清与MEBO,血清与地塞米松无差别即角膜上皮愈合速度差别无意义外,其余各对比组间均有差别,即角膜上皮愈合速度差别有意义.除血清外,MEBO促进角膜上皮愈合率明显优于其他药物。

讨论

角膜的营养来自角膜缘血管网、泪膜和房水.角膜上皮在泪膜和眼内组织间形成一个功能性屏障,通过调节从基质内输出的液体,保持基质正常的水合状态.角膜崐上皮损伤或刮除之后.会迅速恢复.其修复过程分为两期,先是潜伏期 ,平均5.5士0.3小时,这期间伤缘有广泛细胞和亚细胞的改变,表现精层细胞脱屑,基底细胞柱状外观丧失,基底膜的半桥粒连接破坏以及细胞突的形成,代表着遗留的尚存活的上皮细胞转化为功能细胞的时间。随后为愈合期,伤口周围上皮细胞以恒定的速度向中心移动,无有丝分裂.先由靠近伤口缘未受伤的上皮细胞,尤其基底细胞开始增大、变平,形成皱膜伸出丝状伪足向中央移行,成为单层细胞的移行缘,移行缘的后边为两层或两层以上的上皮细胞.一旦伤口完全闭合,移行停止,对基底膜稳固的半桥粒附着重形成,有丝分裂开始,终于形成成熟的复层角膜上皮.本文实验,上皮愈合显示两个阶段,手术后2小时,缺损直径不仅不缩小而还有一部分缺损其直径从8mm扩大到8.1～8.5mm之间，这可能与伤缘组织萎缩，受损细胞脱落有关。6小时后上皮缺损始显缩小,直至愈合,呈一条直线形愈合.角膜上皮缺缺损的修复过程,从潜伏期到愈合期结束是否顺利,也要受到全身或局部用药和眼球内外环境的影响.本实验通过涂、滴或戴角膜接触镜,从多方因素观察对角膜上皮愈合的影响,以证实各种方法及药物的疗效程度。

MEBO又称湿润烧伤膏(北京光明中医烧伤创疡研究所生产),主要由黄柏内脂,B-谷甾醇、麻油、蜂蜡等组成,为治疗烧伤创疡特效新药,有消肿止痛,促进创面愈合,防止创面感染和愈后瘢痕形成等作用[3].近年来,研究证实,MEBO对各种烧伤及创疡治疗效果明显优于其他各种方法[4],但在眼部还没有有关对比性研究报告.我们初步进行了MEBO对兔角膜上层、内皮层碱烧伤的治疗性研究,证实MEBO对兔角膜上皮层、内皮层碱烧伤的治疗性研究,证实MEBO对无血管组织____角膜烧伤创面有显著性治疗作用[2、5].为进一步证实MEBO对角膜创伤愈合的影响,及与有关药物的作用地位,进行本研究,结果证实MEBO对创伤愈合率明显优于其他各组(除血清组),裂隙灯显微镜观察证实,愈后无明显斑翳形成.并进一步认识到MEBO在角膜创伤愈合中的药物作用机理.(1)MEBO为大分子粘性基质组成,与创面蛋白有亲合力,充填于创面区,起到轿梁作用,并直接接刺激诱导细胞有秩分裂移动,促进创面愈合.(2)MEBO中含有创面修复所需的能量葡萄糖,可补充其能量不足.维生素及有机酸于级持组织呼吸代谢,结缔组织增生有关,可直接参与局部营养支持,避免瘢痕组织形成[6].其内锌和酶类起到了加速促进上皮修复能力[7].其内蛋白质是构成细胞膜的基本成份,能参与细胞生长、分化和调节.(3)MEBO于创面形成完整的自动引流循环系统,可代替因损伤所致局部代谢功能障百,其基质成分吸附创面代谢(排泄)物质,并转运到药膏外表,同时,药物有效成分不断渗透作用于创面,补充其修复所需成份,这种微粒子间的自动转运和乳化分散过程[8],是治疗无血管组织的主要途径.(4)MEBO中黄柏内脂起到了抗炎、镇痛及增强局部免疫功能作用，是消肿止痛、减轻炎性反应,控制局部感染的主要成份.

同种血清:近年来许多研究证明,血浆内存在着一种大分子糖蛋白,是细胞与细胞外的纤维,基质间的一种联接介质,称为纤维结合蛋白,能附于胶原组织和聚糖蛋白上,粘附于细胞表面某些受体处,在上皮细胞间起到桥梁作用,加强上皮的糖附能力,并与细胞内支架如微丝,肌动蛋白等有一定联系,诱发细胞的移行.角膜上皮缺损后,移行.角膜上皮缺损后,移行的上皮与创面能牢固粘合与纤维蛋白的作用有关.眼化学伤后,用自血滴眼或结膜下注射,因血中含有巨球蛋白,有抑制胶原酶的作用,并可释放出纤维溶解素,能分离组织减少睑球连,有加速角膜周围血管网和受伤角膜感觉的恢复及改善角膜营养,促进组织再生的作用.我们已有研究证实,纤维连接蛋白能加速角膜上皮细胞移行[2].本文用同种血清滴眼,进行兔角膜上皮细胞愈合率的观察,也证实有明显促进角膜上皮移行作用,但其作用较MEBO稍弱。

0.5%地塞 米松:皮质类固醇对角膜伤口愈合的作用,报导不一,认为长期用高浓度的皮质类固醇有减慢上皮再生和基质口愈合速度的作用,但其机理不能确定,然而角膜烧伤后,立刻用皮质类固醇,可有良好的抗炎作用,也能减少溃疡和新生血管的形成[9].也有人证明,皮质类固醇能抑制结膜细胞向角膜表面移行,但不影响角膜上皮的再形成[10].本文用0.5%地塞 米松滴眼,不仅对角膜上皮细胞的移行、伤口的愈合没有抑制作用,且有明显促进作用.提示:单纯的角膜上皮缺损,用0.5%地塞米松滴眼,来控制炎症、促进愈合是可行的,但有较大副 作用,其对角膜上皮民合作用效果远不及MEBO,对治疗对象有一定选择性.

2.5万u/ml维生素A:维生素A有促进上皮组织生长及维持其正常机能的作用.对维生素A促进伤口愈合作用已有不少报告[1],但也有认为维生素A对上皮的再形成没有促进作用.本文应用2.5万u/ml维生素滴泪,发现其对角膜上皮愈合影响不大,更不能与MEBO疗效相比。

角膜接触接镜：戴由PMMA 制成的硬角膜接触镜后，角膜上皮代谢所需要的营养物质和氧、主要靠到镜与角膜间的泪液提供，睁眼时，眼睑的压力，使镜后产生正压，将泪液排出，眨眼过后，镜后负压，泪液进入，又使镜片浮起，反复进行，达到泪液交换和更新。角膜对氧的吸收，几乎全靠通过软镜材料本身眨眼挤压作用，在角膜上皮损伤后，局部代谢能力下降，加之戴镜后更降低了角膜对氧的吸收，对创面修复更加不利。也有用戴角膜接触镜接触影响了角膜创面正常愈合，角膜上皮愈合率明显低于各组对照。应用角膜接触镜治疗角膜损伤应慎重。

参考文献

〖1〗 Smolin G. et al. Tretinoin and corneal epithelial wound healing . Arch Ophthalmol 1979;97:545.

〖2〗 黄庆山等，纤维连接蛋白和MEBO对家兔角膜碱烧伤治疗研究，中国烧伤创疡杂志。1995；1：18。

〖3〗 徐荣祥， 烧伤创疡医学总论。中国烧伤创疡杂志。1989；1：11。

〖4〗 徐荣祥， 论烧伤创面治疗原则，中国烧伤创疡杂志。1992；4：8。

〖5〗 黄庆山等，MEBO对家兔角膜内皮碱烧伤修复的动力学研究。第四届全国烧伤创疡学术会论文汇编，1995年12月，北京。

〖6〗 黄庆山等，MEBO与PIC联合治疗单纯疱疹性角膜溃疡25例临床观察。中国烧伤创疡杂志。1993；2：21。

〖7〗 Morleyte et al. Zinc deficiency chronic starvation and hypothalamicpituiftary thyroid function. Am J Clin Nutr 1980; 33:176.

〖8〗 杜怀恩，浅谈MEBO的生物药剂学因素与治疗有关系。中国烧伤创疡杂志。1995；1：8。

〖9〗 Woost P.G. et al. Effect of growth factors with Dexamethasone on healing of rabbit corneal stromal incisions. EXP Eye Res 1985;40:47.

〖10〗 Srinirasan B.D.,Corneal Reepithelializaton and anti-inflammatory agents. Jr . Am Ophth . Soc 1982;756.