刘玉玲1,陈侠英2,陈旭林2,孙业祥2
【作者单位】1.安徽医科大学第一临床学院外科总论实验室，安徽合肥230032
2. 安徽医科大学第一附属医院烧伤科，安徽合肥230022
【摘要】目的： 观察大鼠严重烫伤早期肝脏超微结构的变化及丹参的影响作用。方法： 建立30%Ⅲ度烫伤模型，88只Wistar大鼠随机分为正常对照组（A组，8只）、平衡液复苏组（B组，40只）和丹参治疗组（C组，40只），B、C两组烫伤后立即按Parkland公式腹腔注射平衡液120ml/kg ，C组在同样治疗的基础上腹腔注射丹参注射液3ml/kg，B、C两组分别于伤后3，6，12，24，48h各时相点任选两只动物肝脏，取其左外叶分两份标本分别置于95%酒精和25%戊二醛小瓶中固定，光镜、电镜下观察肝组织形态学变化。结果：肝组织形态学和超微结构改变在伤后6h开始出现，并进行性加重，48h最明显；丹参治疗组肝组织病理改变轻于复苏组。结论： 严重烫伤早期肝组织超微结构即可发生改变，丹参治疗后肝组织超微结构改变减轻。
【关键词】丹参；烫伤；肝脏； 超微结构
【中图分类号】R 28271； R644
【文献标识码】A【文章编号】1001-0726（2006）02-0081-04
The effect of salvia miltiorrhiza injection on hepatic ultra-structure changes in scalded rats at the early stage
LIU Yu-ling1, CHEN Xia-ying2, CHEN Xu-lin2, et al.
1. Experimental Surgery Laboratory, the 1st Clinical College, Anhui Medical University, Hefei, Anhui Province 230032，China;
2. Dept. of Burns, the 1st Affiliated Hospital, Anhui Medical University, Hefei, Anhui Province 230022,China
【Abstract】 Objective: To observe changes in hepatic ultra-structure in severely scalded rats at the early stage and to study the effect of salvia miltiorrhiza injection on the changes. Method: Eighty-eight Wistar rats were randomly divided into three groups. In group A, 8 healthy rats served as normal control. In group B, 40 rats were scalded and immediately treated with intra-peritoneal injection of lactated Ringer's solution (120 mg/kg) for equilibrium resuscitation. In group C, 40 rats were scalded and treated intra-peritoneally with lactated Ringer's solution (120 mg/kg) and salvia miltiorrhiza injection (3 ml/kg). At 3, 6, 12, 24 and 48 hours post injury, 2 rats from groups B and C were killed and their hepatic left lateral lobes were fixed with 95% alcohol and 25% glutaraldehyde respectively. Histological changes in the liver tissue were observed under optical and electron microscopes. Result: A series of histological and ultra-structure changes in the liver were found at 6 hours post injury and became progressively more severe and reached the worst at 48 hours post injury. In group C, the pathological changes in liver tissue was less than that in group B. Conclusion: There is a series of histological and ultra-structure changes in the liver tissue of scalded rats at the early stage post injury. Salvia miltiorrhiza injection can lessen the severity of the changes.
【Key words】Salvia miltiorrhiza; scald; liver; ultra-structure
烧伤后肝实质损伤，不仅影响肝功能，而且严重威胁着烧伤患者的生命。然而，对烧伤后内脏并发症的病理学研究以往多注意心、肺、肾等内脏变化，对肝脏实质结构的研究不多［1］。组织病理检查是反映肝脏病理学变化的最直接指标。本实验旨在观察大鼠烫伤早期肝组织超微结构的改变及丹参的影响作用。
一、材料与方法
1.动物及分组： 健康成年普通级Wistar大鼠88只，♀♂各半，体重200±20g , 由安徽医科大学实验动物中心提供。将动物随机分为正常对照组（A组，8只）、平衡液复苏组（B组，40只）、丹参治疗组（C组，40只）。B、C两组均分为伤后3，6，12，24，48h 5个时相点，每个时相点8只动物。
2.药品与试剂： 丹参注射液为正大青春宝药业有限公司产品, 规格10ml/ 支，批号 Z330201
3.动物模型的制作： B、C两组大鼠用1g/L 的戊巴比妥钠（30ml/kg体重）腹腔注射，背部和腹部剪毛后置95℃水浴12s［2］, 造成总体表面积30%TBSAⅢ度烫伤，伤后即刻按Parkland公式腹腔注射平衡盐溶液（120ml/kg）； C组在同样复苏的基础上腹腔注射丹参注射液（3ml/kg）；对照组只麻醉剪毛，不烫伤。
4.组织形态学检查： 复苏组和治疗组分别于伤后3，6，12，24和48h 5个时相点活杀后迅速打开腹腔，取出肝脏，每一时相点任选两只动物肝脏取其左外叶分两份标本，分别置于2.5%戊二醛和95%酒精小瓶中固定，石蜡包埋切片及HE染色，OLYMPUS光学显微镜和JEM—100型透射电镜观察组织的形态学变化；对照组于伤后即刻用同样的方法处理肝组织并镜检。
二、结果
1. 对照组：（1）光镜观察：肝细胞无水肿，肝索排列整齐，肝窦无狭窄；（2）电镜观察：肝细胞核膜清楚，线粒体无肿胀，嵴突完整，糖原颗粒及粗面内质网丰富。
2. 复苏组：（1）光镜观察：烫伤后6h~12h，肝细胞轻度水肿，肝索轻度紊乱，肝窦轻度狭窄，烫伤后24h~48h，肝细胞浊肿变性，肝索排列紊乱，肝窦狭窄（见照片1，3）；（2）电镜观察：烫伤后6h~12h，肝细胞核膜较清楚，胞浆内可见线粒体轻度肿胀，嵴突完整糖原颗粒及粗面内质网轻度减少，部分嵴突破坏。烫伤后24h~48h，肝细胞核形不规则，线粒体明显肿胀及空泡变，嵴突破坏，粗面内质网扩张，糖原颗粒减少（见照片5，7）。
照片1：复苏组： 烫伤后24h，肝细胞浊肿变性，部分嗜酸性变，肝索紊乱，肝窦狭窄。（HE×200）
照片3:复苏组： 烫伤后48h，肝细胞浊肿变性，部分气球样变，肝索紊乱，肝窦狭窄。（HE×200）
照片5:复苏组：烫伤后24h, 肝细胞核形不规则，大部分线粒体明显肿胀及空泡变，嵴突破坏。（TEM×10k）
照片7：复苏组：烫伤后48, 肝细胞结构核膜不清，胞浆水肿，线粒体明显肿胀，
嵴突破坏。（TEM×10k）
3. 治疗组:（1）光镜观察：烫伤后6h ~12h，肝细胞水肿，肝索排列整齐，肝窦轻度狭窄；（2）烫伤后24h~28h，肝细胞肿胀，肝索排列紊乱，肝窦狭窄（见照片2，4）；（3）电镜观察：烫伤后6h ~12 h ，肝细胞核膜较清楚，胞浆内见部分线粒轻度肿胀，少数嵴突破坏，粗面内质网及糖原颗粒丰富。烫伤后24h~48 h，肝细胞核膜尚清楚，线粒体肿胀，嵴突有破坏（见照片6，8） 。
照片2:治疗组： 烫伤后24h，肝细胞轻度肿胀，肝索紊乱，肝窦轻度狭窄。（HE×400）
照片4:治疗组： 烫伤后48h，肝细胞浊肿变性，肝索紊乱，肝窦狭窄。（HE×200）
照片6：治疗组：烫伤后24h, 肝细胞核膜尚清楚，部分线粒体肿胀，嵴突破坏。
（TEM×10k）
照片8：治疗组：烫伤后48h, 肝细胞核膜
尚清楚，部分线粒体轻度肿胀，嵴突破坏。
（TEM×10k）
三、讨论
1.烫伤后大鼠肝脏超微结构的改变：肝脏是机体的重要器官之一，烧伤后的肝实质损害，不仅影响肝解毒功能，而且严重威胁烧伤患者的生命［1］。本实验观察到：30%TBSAⅢ度烫伤后6h大鼠肝组织即开始出现组织形态学改变，光镜下：烫伤后6h~12h，肝细胞轻度水肿，肝索轻度紊乱，肝窦轻度狭窄，烫伤后24h~48h，肝细胞浊肿变性，肝索排列紊乱，肝窦狭窄。电镜观察：烫伤后6h~12h，肝细胞核膜较清楚，胞浆内可见线粒体轻度肿胀，嵴突完整，糖原颗粒及粗面内质网轻度减少，部分嵴突破坏。烫伤后24h~48h，肝细胞核形不规则，线粒体明显肿胀及空泡变，嵴突破坏，粗面内质网扩张，糖原颗粒减少；胡骁骅等［3］观察到：大鼠30%TBSAⅢ度烫伤后6h可见点片状或局灶性肝细胞变性，细胞呈不同程度的混浊肿胀；伤后24h变性程度加重，出现小灶性肝细胞坏死；伤后48h肝细胞紊乱坏死程度加重，出现核固缩、核碎裂现象；周萍等［1］发现，30%TBSAⅢ度烫伤大鼠，光镜下可见：伤后6h~12h中央静脉、门脉区血管周围带肝细胞出现大量脂滴，肝窦间隙增宽，伤后24h~48h肝细胞变性更明显，并可见点状或小片状溶解性坏死，电镜下可见:伤后6h~12h肝细胞浆内线粒体肿胀，内质网扩张，伤后24h~48h肝细胞浆内线粒体退变，核皱缩；表明了严重烫伤早期肝组织超微结构即可发生改变，证实了肝脏是烧伤早期易受损器官之一。
2.丹参对大鼠肝脏超微结构改变的影响： 丹参是唇行科鼠尾草属植物，是“活血化淤”中草药中有代表性的一种，其水溶部分具有抗氧化、抗凝、抗血栓、抗心脑缺血作用，可以扩张血管，改善外周微循环，进而改善组织器官的血液灌流，对多种动物实验性心、肝、肺等组织损伤均具有明显保护作用［4，5］。组织病理检查是反映肝脏病理学变化的最直接指标。本实验发现在治疗组各相应时相点肝细胞浊肿变性、肝索紊乱、肝窦狭窄及线粒体肿胀、嵴突破坏程度均轻于复苏组。赖凌燕［6］研究丹参对实验性酒精性肝损伤的作用，观察到丹参治疗组肝细胞肿胀程度及脂肪低空泡程度明显比酒精组轻，肝细胞脂肪变及线粒体肿胀程度均较轻。郑晓宾［7］研究丹参防治实验性急性肝损伤的机制，结果发现：丹参治疗组肝组织坏死面积显著低于肝损伤组( P＜0001)。潘其声等［8］研究发现：与四氯化碳损伤组相比较，丹参治疗组脂肪变性程度及坏死面积、肝细胞小叶破坏程度、线粒体变性程度均明显降低，证实了丹参对烫伤后肝损伤有良好的保护作用。
参 考 文 献
［1］周萍，黄宏，陈林. 烧伤后大鼠肝脏的形态学变化与肝功能的关系［J］. 中国危重病急救医学,2002, 14（4）：201~203.
［2］陆树良. 烧伤动物模型的制作. 烧伤创面愈合机制与新技术［M］. 人民军医出版社, 2003：177~178.
［3］胡骁骅，陈忠，孙永华. 高氧平衡盐溶液对烫伤大鼠肝脏损害的保护作用［J］. 中华烧伤杂志， 2003 ,19（3）：148~150.
［4］张白嘉，刘榴. 丹参水溶部分药理研究进展［J］. 中草药，1996，27（10）：634~636.
［5］卢奇萍，史陈让，吴在德等. 丹参用于肝切除围手术其预处理的临床研究［J］. 中华试验外科杂志,1996，13（3）：149~150.
［6］赖凌燕. 丹参对实验性酒精肝损伤保护作用的初步研究. 广西医科大学学报［J］.1999， 16（4）：480~481.
［7］郑晓宾，韩德五，许瑞龄等. 丹参防治实验性急性肝损伤机制的研究［J］. 中国面医学杂志，1997, 13（3）：157~158.
［9］潘其声，刘怡晟. 肝细胞生长因子和丹参对大鼠急性肝损伤保护作用的实验研究［J］. 江苏临床医学杂志，1997，1（3）：173~176.
【作者简介】
刘玉玲（1969～），女（汉族），安徽萧县人，1991年毕业于安徽医科大学，硕士研究生.
陈侠英（1945～），女（汉族），安徽淮北市人，1969年毕业于安徽医科大学，主任医师，教授，硕士生导师.
陈旭林（1972~），男（汉族），安徽庐江县人，1994年毕业于皖南医学院，医学博士，副教授，硕士生导师.
（收稿日期：2005-12-19；修回日期：2006-01-29）
照片3:复苏组： 烫伤后48h，肝细胞浊肿变性，部分气球样变，肝索紊乱，肝窦狭窄。（HE×200）
照片5:复苏组：烫伤后24h, 肝细胞核形不规则，大部分线粒体明显肿胀及空泡变，嵴突破坏。（TEM×10k）
照片7：复苏组：烫伤后48, 肝细胞结构核膜不清，胞浆水肿，线粒体明显肿胀，
照片4:治疗组： 烫伤后48h，肝细胞浊肿变性，肝索紊乱，肝窦狭窄。（HE×200）
照片6：治疗组：烫伤后24h, 肝细胞核膜尚清楚，部分线粒体肿胀，嵴突破坏。